摘要: | 本发明涉及成分,方法和多核苷酸合成的热启动工具,包括引多核苷酸扩展套件模板和聚合酶链反应(PCR)。热启动是由一个热灭活阻断聚合酶蛋白提供,该热灭活阻断聚合酶蛋白绑定着模板多核苷酸引物,并防止它们进入耐热核酸聚合酶。合成反应的高温使阻塞聚合酶变性,从而使耐高温聚合酶开始活动。本发明包括一特定的蛋白质,它是一种源于大肠杆菌DNA聚合酶Klenow片段突变的阻止聚合酶。这种突变体实际是没有聚合酶活性,和3`到5`外切酶活性。使用这种热灭活阻断聚合酶和一耐高温的聚合酶,可以减少非特异性启动不必要的扩增产物与积累,增加反应的特异性和灵敏度。 |